反相高效液相色譜(RP-HPLC)是液相色譜中zui常用的模式,廣泛應(yīng)用于化工制藥生物工程等領(lǐng)域。RP-HPLC中溶劑系統(tǒng)的選擇和優(yōu)化一直是液相色譜領(lǐng)域的熱門研究課題,對(duì)于多組分目標(biāo)物的分析與分離,有效選擇并優(yōu)化色譜溶劑系統(tǒng)仍存在很多問題,本研究考察了溶劑系統(tǒng)的強(qiáng)度,極性等參數(shù)對(duì)RP-HPLC分離性能的影響。
色譜柱:UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm,5μm;
柱溫:25℃;
檢測(cè)器:UV225nm;
流速:1.0mL/min;
進(jìn)樣量:10μL。
流動(dòng)相A :0.1%磷酸 B:ACN,A:B=3:7,
色譜柱:Xtimate® 4.6mm×150mm,5μm。
流動(dòng)相A :0.1%磷酸 B:ACN,A:B=3:7,
色譜柱 :UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm,5μm。
由圖譜判斷8.6min峰內(nèi)夾雜小峰未分開,UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm,5μm更適合分離。
考慮不同溶劑洗脫強(qiáng)度不同,有機(jī)相中加入甲醇,流動(dòng)相A :0.1%磷酸 B:ACN:甲醇=8:2,A:B=3:7。
從圖譜中可以看出加入甲醇后峰明顯分離。
調(diào)整有機(jī)溶劑比例,流動(dòng)相A :0.1%磷酸 B:ACN:甲醇=7:3,A:B=3:7。
調(diào)整有機(jī)溶劑比例后可以得出10.7min和11.9min分離度增加到3.0。
優(yōu)化方法,流動(dòng)相A :0.1%磷酸 B:ACN:甲醇=7:3,A:B=4:6。
從圖譜中可以看出將峰分開,分離度增大,適當(dāng)?shù)恼{(diào)整有機(jī)相種類及比例可以提高分離性能。