蛋白和配體結(jié)合的強弱不同，對于蛋白檢測以及親和分離純化實驗有顯著影響。在設(shè)計實驗時應(yīng)考慮這種結(jié)合強弱影響，以便采用合適的蛋白或配體濃度（包括zui低檢測限濃度），估算結(jié)合時間，獲得最佳并且實用的結(jié)果。 這對于室溫下易失去活性，或希望盡可能保持最高活性蛋白的純化尤為重要。

常規(guī)的蛋白檢測方法，比如ELISA，只能測定實驗結(jié)束時的蛋白結(jié)合數(shù)值，不能跟蹤整個過程。這不利于獲取結(jié)合的動力學(xué)數(shù)據(jù)，阻礙了實驗的優(yōu)化。自從上個世紀(jì)90年代Biacore商品化surface plasmon resonance技術(shù)后，目前已有幾種生物傳感器技術(shù)，能夠跟蹤蛋白和配基的real-time結(jié)合過程，檢測結(jié)合的全部過程，給出結(jié)合的動力學(xué)數(shù)據(jù)。下圖是我在SRU Biosystems用光學(xué)生物傳感測定蛋白A和不同濃度人類IgG隨時間變化的結(jié)合曲線。IgG濃度在100μg/mL時，結(jié)合在2-3分鐘內(nèi)迅速上升后，緩慢增加。在濃度減小時，結(jié)合速度變慢。濃度在6.25μg/mL時，結(jié)合在180分鐘內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定地增加。濃度小于1μg/mL時，結(jié)合仍然進行，但是十分緩慢。

絕大多數(shù)生化實驗室，沒有real-time跟蹤檢測手段，蛋白檢測或者純化過程中，確定蛋白的濃度和結(jié)合時間通常根據(jù)結(jié)合的強弱來確定，而結(jié)合強弱是通過解離常數(shù)來判斷的。

在化學(xué)、生物化學(xué)中，解離常數(shù)（K_D) 是一種反應(yīng)的平衡常數(shù)，用于測量較大物體可逆地分離（解離）成較小成分的傾向。解離常數(shù)是結(jié)合常數(shù)的倒數(shù)。 雖然解離常數(shù)是動力學(xué)理論的參數(shù)， 但是它在生物化學(xué)，尤其實驗設(shè)計上有現(xiàn)實意義的指導(dǎo)作用。

鏈霉親和素（streptavidin）是生物化學(xué)常用的試劑。它于生物素（biotin）結(jié)合的K_D非常小，僅為~10^?14M。 強度與共價鍵類似。前文介紹過，鏈霉親和素是非常穩(wěn)定50K_D蛋白，經(jīng)常用來與熒光、紅外、ELISA標(biāo)記等化學(xué)結(jié)合而不失去其生物活性。生物素是分子量244，帶有羧基的小分子。 容易與蛋白化學(xué)結(jié)合。這樣帶有標(biāo)記的鏈霉親和素，與帶有生物素的蛋白結(jié)合，從而避免直接標(biāo)記蛋白。鏈霉親和素和生物素K_D小。對比于直接標(biāo)記二抗的方法，采用標(biāo)記的鏈霉親和素-生物素的方法用量小、時間短，達到準(zhǔn)確檢測的目的?；谶@種原因，標(biāo)記的鏈霉親和素、化學(xué)活化的生物素以及生物素結(jié)合的二抗等蛋白檢測試劑，比較容易購買，這對于實驗方案設(shè)計非常便利。