疫苗，是2020年一個(gè)被頻繁提及的詞，在以后的很長(zhǎng)一段時(shí)間里也會(huì)持續(xù)出現(xiàn)在大家的視野中。接種疫苗是預(yù)防和控制傳染病經(jīng)濟(jì)、有效的公共衛(wèi)生干預(yù)措施，對(duì)于家庭來(lái)說(shuō)也是減少成員疾病發(fā)生、減少醫(yī)療費(fèi)用的有效手段。

不同疫苗的生產(chǎn)時(shí)間各不相同，有的疫苗可能需要22個(gè)月才能生產(chǎn)出一個(gè)批次。疫苗的開(kāi)發(fā)是一個(gè)漫長(zhǎng)而復(fù)雜的過(guò)程，且成本很高。為保證疫苗的安全性和有效性，降低接種疫苗的副作用和雜質(zhì)的免疫干擾，需要對(duì)疫苗進(jìn)行有效的分離純化，去除細(xì)胞培養(yǎng)液中的其它雜質(zhì)，提高疫苗有效成分的含量和純度。本文簡(jiǎn)要介紹了疫苗分離和純化的當(dāng)前方法，以及疫苗純化技術(shù)的應(yīng)用，發(fā)展和前景。

疫苗純化路線

疫苗在研制方式、組成成分和物理、化學(xué)性質(zhì)及原始來(lái)源等諸多方面都存在或大或小的差異，其分離純化方法具有相對(duì)特殊性。針對(duì)不同的疫苗應(yīng)選用不同的分離純化路線，但一般而言，都包括兩個(gè)基本階段：初級(jí)分離和精制純化。初級(jí)分離階段的主要任務(wù)是分離細(xì)胞和培養(yǎng)液，破碎細(xì)胞釋放產(chǎn)物(如果產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi))，濃縮產(chǎn)物和去除大部分雜質(zhì)等，這一階段可選用的分離方法包括細(xì)胞破碎技術(shù)、離心沉降、鹽析和超濾濃縮技術(shù)等；精制純化階段則選用各種具有高分辨率的技術(shù)，以使目的蛋白和少量干擾雜質(zhì)盡可能分開(kāi)，達(dá)到所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，超速離心技術(shù)和各種層析技術(shù)成為當(dāng)前達(dá)到此目的的主要方法。

膜技術(shù)（粗純技術(shù)）

膜分離和超速離心純化技術(shù)在疫苗、蛋白組分、多肽及生物大分子的純化過(guò)程中有著廣闊的發(fā)展前景。用該工藝制備的疫苗，純度和性狀符合規(guī)程要求，但抗原回收率相對(duì)較低、操作繁瑣且周期長(zhǎng)、技術(shù)設(shè)備要求高，近年來(lái)已逐漸為日臻成熟的層析技術(shù)所代替，在基因工程疫苗的研制中尤為如此。

層析技術(shù)（精純技術(shù)）

凝膠過(guò)濾色譜

也稱(chēng)為排阻色譜，凝膠滲透，凝膠色譜，分子篩色譜等。它是液相色譜中按分子大小分離的技術(shù)。它主要用于組分分離：脫鹽，更換緩沖液，去除有害試劑，純化蛋白質(zhì)，肽，多糖等生物分子。具有更換緩沖液快速，溫和，產(chǎn)率高。適用于任何緩沖液系統(tǒng)。

離子交換色譜

離子交換色譜法是一種吸附色譜法，可根據(jù)樣品電荷差異起到分離作用。它被廣泛用于所有純化階段和所有規(guī)模生產(chǎn)，具有可控，高選擇，高容量，樣品濃縮和高回收率特點(diǎn)。另外，沒(méi)有一種離子交換是完美的。選擇正確的離子交換介質(zhì)非常重要。不同的樣品和不同的純化目的需要不同的離子交換介質(zhì)。此外，值得注意的是，樣品在上樣之前要進(jìn)行處理：除去顆粒物（離心或過(guò)濾方法），調(diào)節(jié)pH和離子強(qiáng)度（使用脫鹽或緩沖液交換方法）。

疏水色譜

疏水色譜法是基于液相色譜中生物分子的疏水性的技術(shù)。它是離子交換技術(shù)，凝膠過(guò)濾技術(shù)和親和色譜技術(shù)的補(bǔ)充。具有溫和且不變性的純化；這也是一種濃縮技術(shù)；它具有高選擇性和高收率的特點(diǎn)。

親和層析

親和色譜是一種通過(guò)生物分子之間的特異性相互作用來(lái)分離生物分子的技術(shù)。這是一種特別易于使用的方法，該方法簡(jiǎn)單易用，純度高且樣品濃縮。純化蛋白質(zhì)更常見(jiàn)，因?yàn)樗子谑褂?。一步純化可以使純度大?5％，去除特定雜質(zhì)并快速分離。它廣泛用于分離單克隆抗體和多克隆抗體，融合蛋白，酶，DNA結(jié)合蛋白以及任何可以結(jié)合其配體的蛋白。

方法組合設(shè)計(jì)純化工藝

用于傳統(tǒng)疫苗和新型疫苗的純化技術(shù),必須依靠各學(xué)科相關(guān)技術(shù)之間的結(jié)合而發(fā)展起來(lái)的，至今尚無(wú)一項(xiàng)技術(shù)能單獨(dú)承擔(dān)分離純化的全過(guò)程。創(chuàng)新的分離純化工藝，往往是由多項(xiàng)新技術(shù)和原有技術(shù)的優(yōu)勢(shì)組合而成。傳統(tǒng)的離心、過(guò)濾和沉淀技術(shù)更多只是作為整個(gè)疫苗分離純化工藝的起始步驟，用于初步分離過(guò)程，層析技術(shù)與沉淀、離心等傳統(tǒng)分離技術(shù)的結(jié)合已逐漸成為疫苗分離純化的主流。

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